Nature Methods：抗體驗證指南出爐

導讀：為(wei) 了刺激研究界實現更高標準的抗體(ti) 重複性，抗體(ti) 驗證工作組(IWGAV)近日出台了一套指南。這些指南發表在9月5日的《Nature Methods》雜誌上，強調了抗體(ti) 驗證需要針對應用和背景來開展。

　　據估計，因抗體(ti) 質量不佳，生命科學領域每年的損失達到8億(yi) 美元。同時，這也造成了無數的實驗失敗，浪費了寶貴的樣本和科學家的青春。盡管科學界已經意識到這個(ge) 問題，但目前仍然缺乏抗體(ti) 驗證的整體(ti) 框架。

　　為(wei) 了刺激研究界實現更高標準的抗體(ti) 重複性，抗體(ti) 驗證工作組(IWGAV)近日出台了一套指南。這些指南發表在9月5日的《Nature Methods》雜誌上，強調了抗體(ti) 驗證需要針對應用和背景來開展。

　　這篇題為(wei) “A Proposal for Validation of Antibodies”的文章是由IWGAV的數名成員發表的，包括工作組主席、瑞典*理工學院的微生物學教授Mathias Uhlén。文章提出了五點，以指導特定應用中的抗體(ti) 驗證。

　　• 遺傳(chuan) 策略：測定對照細胞或組織中的相關(guan) 信號，這些對照中的目標基因已利用CRISPR或RNAi等技術敲除或敲低。

　　• 正交策略：利用不依賴抗體(ti) 的方法定量多個(ge) 樣品，然後檢查依賴抗體(ti) 和不依賴抗體(ti) 這兩(liang) 種定量之間的相關(guan) 性。

　　• 獨立抗體(ti) 策略：利用兩(liang) 個(ge) 或更多的獨立抗體(ti) 來識別目標蛋白上的不同表位，再通過比較和定量分析來確認特異性。

　　• 表達標記蛋白：修飾內(nei) 源的目標基因，增加親(qin) 和標簽或熒光蛋白的序列。標記蛋白的信號可與(yu) 基於(yu) 抗體(ti) 的檢測相關(guan) 聯。

　　• 免疫捕獲加上質譜分析：將免疫捕獲與(yu) MS分析相結合，以確定與(yu) 純化的抗體(ti) 直接作用的蛋白質，以及可能與(yu) 目標蛋白形成複合物的蛋白質。

　　這篇文章還對生產(chan) 商和使用者提出建議，以確保長期的抗體(ti) 重複性。作者們(men) 建議使用者在自己特定的應用或樣品中，至少運用上麵的一種策略來開展驗證。同時，他們(men) 還建議使用者按照一定的形式報告，包含貨號、批號和RRID(研究資源標識符)，以確保研究中使用的任何抗體(ti) 可被明確識別。

　　同時，作者們(men) 也向生產(chan) 商提出了類似的建議，至少運用一種策略來驗證，並提供盡可能多的抗體(ti) 信息，如鑒定檢測中的抗體(ti) 濃度、細胞提取物的濃度、抗體(ti) 生產(chan) 所用的免疫原、抗體(ti) -表位的親(qin) 和力、緩衝(chong) 液配方等。

　　“這篇文章邁出了重要的*步，有望製定出廣泛接受的抗體(ti) 驗證標準，確保生命醫學研究使用高質量且一致的抗體(ti) ，”Uhlén博士表示。“我們(men) 期待抗體(ti) 用戶、出版商、資助機構和生產(chan) 商的反饋，以幫助加強這個(ge) 初步建議，並確保這些基本工具的可靠性。”

　　在文章發布之後，抗體(ti) 生產(chan) 商之一 – 賽默飛世爾公司承諾，它將按照IWGAV的建議來驗證其抗體(ti) 的特異性。賽默飛表示，它將很好地遵循這個(ge) 指南，並借助其的質譜、CRISPR和siRNA平台來開展驗證。此外，對於(yu) 通過新標準的抗體(ti) ，公司會(hui) 在上標注，以表示它通過特異性檢測。

　　賽默飛世爾的生命科學部門總裁Peter Silvester表示：“賽默飛世爾很高興(xing) 看到抗體(ti) 驗證工作組的*個(ge) 建議。我們(men) 相信，這些標準將有助於(yu) 對抗用戶在使用這些關(guan) 鍵工具時麵臨(lin) 的挑戰。我們(men) 承諾按照IWGAV的標準來測試我們(men) 的抗體(ti) ，這證明了我們(men) 對科學的承諾，以及我們(men) 提供特異抗體(ti) 的使命。”

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