耐藥性檢測，比基因檢測更廣泛應用的細菌“拉曼組”

　　導讀：中科院青島生物能源與(yu) 過程研究所的論文引起了學界的關(guan) 注。論文提出基於(yu) “拉曼組”的耐藥性快檢技術，證明通過高通量單細胞拉曼成像，能夠不依賴於(yu) 培養(yang) 、快速、定性、定量地表征細菌的藥物應激性並區分其應激機製。

　　耐藥性快檢，一直是擺在中外科學家麵前的一道難題。10月19日《科學報告》上發表了一篇來自中科院青島生物能源與(yu) 過程研究所的論文，引起了學界的關(guan) 注。論文提出基於(yu) “拉曼組”的耐藥性快檢技術，證明通過高通量單細胞拉曼成像，能夠不依賴於(yu) 培養(yang) 、快速、定性、定量地表征細菌的藥物應激性並區分其應激機製。

　　中科院青島生物能源與(yu) 過程研究所單細胞中心主任徐健研究員告訴《中國科學報》記者說：“我們(men) 團隊在研發微生物學新技術新裝備的過程中，敏銳捕捉到了耐藥性檢測技術開發的巨大潛力和機遇。”

　　耐藥性快檢難題

　　20世紀初，世界上三分之一人死於(yu) 肺炎、結核、腸炎及腹瀉。相關(guan) 文獻資料顯示，今天心髒病和癌症成為(wei) 人類的主要殺手，因肺炎和流感死亡的人數則不到4.5%。這是人類應用抗生素在公共衛生領域取得的重要成果。

　　如今，人類卻又走到了事情的另一個(ge) ，濫用抗生素導至耐藥菌的出現及廣泛傳(chuan) 播。對抗耐藥性不僅(jin) 需要研發新型抗生素，還需要發展耐藥性快檢技術和監測體(ti) 係，以提高現有抗生素使用的針對性和有效性，從(cong) 而推遲與(yu) 遏製耐藥性的傳(chuan) 播。

　　因此，今年8月26日國家衛生計生委等14部門聯合印發的《遏製細菌耐藥國家行動計劃(2016—2020)》明確提出：“加強抗菌藥物應用和耐藥控製體(ti) 係建設”和“完善抗菌藥物應用和細菌耐藥監測體(ti) 係”。

　　據徐健介紹，自細菌發現至今，培養(yang) 法仍是病原菌藥敏試驗的主流通用標準，但對於(yu) 臨(lin) 床常見致病菌，培養(yang) 法耗時長達24-48小時(對於(yu) 難培養(yang) 或生長緩慢的細菌則無能為(wei) 力)，同時無法揭示耐藥機製。

　　“PCR(聚酶鏈式反應)和基因組測序技術可通過鑒定耐藥基因來間接推測耐藥的可能性。”徐健進一步指出，“但該技術依賴於(yu) 已知的耐藥基因參照序列，故無法分析未知的耐藥性，且通常無法定量檢測，因此一般情況下隻能作為(wei) 一種輔助手段。”

　　臨(lin) 床實踐上為(wei) 了指導“用藥”，急需細菌耐藥性及其耐藥機製的直接、快速測量技術。臨(lin) 床需求與(yu) 技術現狀的矛盾如此緊迫和突出，以至於(yu) 2016年9月8日美國國立衛生研究院懸賞兩(liang) 千萬(wan) 美元，專(zhuan) 門激勵細菌耐藥性快檢技術的研發。

　　提出“拉曼組”概念

　　對這個(ge) 領域的探索，中國科學家一直都在積極嚐試。從(cong) 2012年起，徐健團隊就意識到耐藥性檢測技術開發的巨大潛力。利用單細胞中心近六年來開發的單細胞成像技術，徐健及其博士生滕琳提出了“拉曼組”的概念。

　　滕琳向記者解釋了什麽(me) 是“拉曼組”：它是特定條件和時間點下，一個(ge) 細菌細胞群體(ti) 之單細胞拉曼光譜的集合。每個(ge) 單細胞拉曼光譜由分別對應於(yu) 一類化學鍵的上千個(ge) 拉曼峰組成，反映的是特定細胞內(nei) 化學物質的成分及含量的多維信息，而且其測量無需破壞細胞、不需要標記，通常僅(jin) 需毫秒乃至數秒鍾。

　　因此，對於(yu) 任一細菌群體(ti) ，一個(ge) “拉曼組”相當於(yu) 單細胞精度、可快速、低成本測定與(yu) 監控的“代謝狀態”或“代謝物組”，其變化可直接反映和表征其針對特定藥物或環境變化的敏感性和耐受性。而不同的抑菌機製會(hui) 引起細胞內(nei) 代謝物組的不同變化，所以“拉曼組”的變化還具有區分乃至識別各種藥物應激機製的潛力。

　　隨後，來自中科院青島生物能源與(yu) 過程研究所單細胞分析部、生物信息團隊、微生物組部等部門的10多人參與(yu) 的攻關(guan) 小組成立，目標直指“拉曼組突破微生物耐藥性快檢”。

　　萬(wan) 事開頭難，在項目進展過程中，滕琳和她的隊友們(men) 遇到了不少困難，其中之一是“拉曼組”的數據分析。滕琳說：“該係列實驗對來自各種藥物種類、劑量、給藥時間的300多個(ge) 細胞群體(ti) 進行了單細胞拉曼成像，采集了超過6000個(ge) 細胞的拉曼光譜，共包括近900萬(wan) 個(ge) 拉曼峰。”

　　重重壓力下，這個(ge) 樂(le) 觀堅毅的女孩沒有低頭認輸。經過四年多的努力，滕琳和攻關(guan) 小組的其他隊員們(men) 發展了一係列數據分析和可視化的新方法，深入挖掘和驗證了“拉曼組”與(yu) 微生物藥物應激反應之間的相互關(guan) 聯，從(cong) 而證明“拉曼組”能快速測量微生物耐藥性並分辨其藥物應激機製。

　　廣泛的應用前景

　　此外，“拉曼組”還能準確測量給藥過程中藥敏性在細菌群體(ti) 中的異質性變化，從(cong) 而為(wei) 研究細菌耐藥性的起源和進化提供了有力工具。科研人員證明了“拉曼組”能夠快速區分抗性細菌與(yu) 非抗性細菌，因此它在抑菌藥物篩選或耐藥細菌篩選這兩(liang) 方麵均具備成為(wei) 一種新式平台技術的潛力。

　　徐健表示，作為(wei) 一種新的“表型組”手段與(yu) 組學大數據類型，“拉曼組”具有重要的優(you) 勢。與(yu) 傳(chuan) 統意義(yi) 上的轉錄組、蛋白組或代謝組不同，“拉曼組”在單個(ge) 細胞精度對細胞群體(ti) 或群落進行快速、低成本的代謝狀態成像與(yu) 監控，這對於(yu) 生命體(ti) 係異質性機製研究具有重要意義(yi) ，同時在藥物篩選、環境檢測、生物資源挖掘、生物過程控製等領域將有廣泛的應用前景。

　　在耐藥性檢測方麵，“拉曼組”基於(yu) 單細胞成像，不依賴於(yu) 細菌的繁殖，通常能夠在一個(ge) 小時內(nei) 完成細菌耐藥性測量和機製區分，因此它在臨(lin) 床耐藥性快檢方麵具有重要優(you) 勢。

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